23.03.2023
Isolierung und Anreicherung von Golgi-Körpern aus Reis-Keimlingen
Kazusato Oikawa, Eppendorf Lab for Biomaterial Chemistry, Kyoto
Shuichi Kani, Eppendorf Himac Technologies, Tokyo
Mark Hünken, Eppendorf SE
Der Golgi-Apparat eukaryotischer Zellen wurde zum ersten Mal vor 120 Jahren von Camillo Golgi beschrieben. Fortschritte in der (Elektronen-) Mikroskopie zeigten dessen komplexe Struktur auf, während weiterführende biochemische Analysen die verschiedenen Funktionen dieses Organells innerhalb der Zelle offenbarten.
In Zellen höherer Organismen ist der Golgi-Apparat für die Synthese komplexer Polysaccharide verantwortlich sowie für die Verarbeitung und Verteilung von Proteinen auf andere Organellen als Teil des Sekretionsweges In der Praxis sind Golgi-Membranfraktionen häufig mit Teilen anderer verbundener Membransysteme, wie z.B. der Vakuole, kontaminiert. Die Dichtegradientenzentrifugation stellt eine der am besten etablierten Methoden zur Anreicherung von spezifischen Membranen dar.
In dieser Application Note beschreiben wir eine Methode, welche eine Abfolge aus differenziellem Pelletieren und Dichtegradientenzentrifugation zum Erhalt von Fraktionen der Golgi-Membran aus Reis-Keimlingen einsetzt. Die angewandte Technik erlaubt die Ernte von hochgradig reinen Extrakten von hoher Qualität zum Zwecke der nachfolgenden Analyse, wie z.B. der Massenspektrometrie.