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Wyatt Technology Europe GmbH

miniDAWN TREOS®: Statische Lichtstreuung (SLS) für die Bestimmung absoluter Molekulargewichte von Proteinen und Polymeren


miniDAWN TREOS® StreulichtdetektorDer miniDAWN TREOS® Streulichtdetektor von Wyatt Technology ist ein 3-Winkel-Gerät der neuesten Generation. Er ermöglicht die Messung von absoluten Molekulargewichten, Radien und zweiten Virialkoeffizienten. Dabei kann der miniDAWN sowohl gekoppelt an die Chromatographie (GPC/SEC) als auch im "Stand Alone"-Modus eingesetzt werden.

Mit MALS (Mehrwinkellichtstreuung, Multi Angle Light Scattering), oft auch als klassische oder statische Lichtstreuung (SLS) bezeichnet, wird das Molekulargewicht von Makromolekülen aufgrund der Menge des von ihnen gestreuten Lichtes gemessen. Die Besonderheit dieser Technologie: Man kann mit ihr absolute Messungen durchführen, d.h. ohne Standards oder Annahmen über die Eigenschaften der Moleküle.

Zudem bietet der miniDAWN TREOS® Streulichtdetektor die beste Sensitivität bei gleichzeitig größtem Messbereich. Sie ist darüber hinaus in Tausenden von wissenschaftlichen Publikationen dokumentiert. Hier können Sie zahllose peer-reviewed Publikationen finden, in denen Untersuchungen mithilfe von Wyatt-Instrumenten veröffentlicht wurden.

Der miniDAWN TREOS® Streulichtdetektor ist nicht sehr leistungsfähig, sondern zudem besonders robust. Die Flusszelle aus Quarzglas kann mit allen organischen und wässrigen Lösungsmitteln benutzt werden. Sie lässt sich vom Anwender leicht ausbauen und reinigen. Alternativ kann man auch das integrierbare Zellreinigungssystem COMET softwaregesteuert einsetzen, das die Zelle mittels Ultraschall automatisch säubert.

miniDAWN TREOS®: Die Spezifikationen

  • Absolute Molekulargewichte ab 500 g/mol
  • 50 mW Laser mit 658 nm Wellenlänge
  • Flusszelle aus Quarzglas
  • DLS Option verfügbar
  • COMET Zellreinigungs-Option verfügbar
  • Gas- und Leck-Detektoren

Integration in HPLC Systeme

Der TREOS® Streulichtdetektor lässt sich problemlos in chromatographische Systeme integrieren. Wyatt Technology führt im Rahmen der Geräteinstallation die entsprechenden Anpassungen durch.

Wyatt Technology Komplettsystem SEC/GPC

Wyatt Technology bietet für die makromolekulare Charakterisierung optimierte Komplettsysteme, GPC-Systeme bzw. SEC-Systeme, an. Sie sind je nach Anwendung für wässrige und / oder organische Laufmittel konfiguriert. Natürlich kann neben MALS auch eine DLS-, Vis-, DRI-, UV-, DAD- und Fl-Detektion gekoppelt werden. Die Anbindung von Fraktionssammlern ist ebenfalls möglich. Für spezielle Anwendungen sind außerdem biokompatible oder metallfreie Anlagen verfügbar.

Komplettsysteme mit FFF

Der TREOS® Streulichtdetektor kann als Detektor auch an die FFF (Feldflussfraktionierung) gekoppelt werden. Die Feldflussfraktionierung ist ein schonendes und leistungsfähiges Verfahren für die Trennung von Makromolekülen und Partikeln. Die Trennung erfolgt im Fluss ohne stationäre Phase. Wyatt Technology bietet leistungsstarke Systeme für die Asymmetrische Feldflussfraktionierung (AF4), Frit-Inlet Feldflussfraktionierung (FI-FFF) und Hohlfaser Feldflussfraktionierung (HF5) an.

Inline Zellreinigung

Wyatt Technology hat das Zellreinigungssystem COMET für den TREOS® Streulichtdetektor entwickelt. COMET ist ein Reinigungsgerät, das die Flusszelle mithilfe von Ultraschalltechnik reinigt. Es ist in das TREOS® integriert, und die Reinigung lässt sich per Software aktivieren. Durch die automatisierte Säuberung der Messzelle erhöht sich die Produktivität des Systems.

Kombination mit DLS

MALS ermöglicht durch die simultane Messung des Streulichtes bei verschiedenen Winkeln die Bestimmung der Molekülgröße in Form des Gyrationsradius. Optional kann ein DLS (Dynamische Lichtstreuung) Detektor in den TREOS® Streulichtdetektor integriert werden. Durch die Kombination beider Messmethoden, MALS und DLS, lassen sich Gyrationsradius und Hydrodynamischer Radius simultan bestimmen. Das Verhältnis dieser zwei Größen ermöglicht Aussagen über die Gestalt der gemessenen Moleküle und Partikel. Bei der Kopplung von MALS mit DLS wird nur eine Flusszelle eingesetzt, da es sich um eine integrierte Lösung handelt. Dies reduziert die sekundäre Bandenverbreiterung und vermindert den Gegendruck im Messsystem.

Protein-Konjugat-Analyse

Durch die Kombination von MALS mit RI und UV erhält man bei der Analyse von Protein-Konjugaten die Molekulargewicht des Komplexes und zusätzlich die Molekulargewicht des Proteins und der zweiten Komponente des Komplexes. Dadurch lässt sich die Zusammensetzung und die Molekulargewichte der Komponenten des Komplexes bestimmen. Dabei kann es sich bei der zweiten Komponente um ein zweites Protein, Polysaccharid, PEG oder eine andere Verbindung handeln. Diese Art der Analyse wird auch bei Membranproteinen angewendet. Als Ergebnis werden hierbei das Molekulargewicht des Membranproteins und das der Mizelle bestimmt.

Kombination mit online Viskositätsmessung

Die Kombination aus online Viskositätsmessung (Vis) und MALS ermöglicht eine umfassende Charakterisierung von Polymeren. Neben den absolut gemessenen Molekulargewichten sind die spezifische Viskosität und der Molekülradius (Rg) - bei zusätzlicher Verwendung von DLS auch der hydrodynamische Radius Rh - verfügbar. Dies ermöglicht die Bestimmung der molekularen Gestalt aus einer Messung mithilfe des Kuhn-Mark-Houwink-Sakurada Plots. Zudem kann man - in Kenntnis der Gyrationsradien sowie der Viskosität - Verzweigungsanalysen durch Anwendung der Zimm-Stockmeyer Theorie durchführen.

Batch-Messungen

Neben der Kopplung an die Chromatographie kann der TREOS® Streulichtdetektor auch als "Stand Alone"-Gerät im Batch-Modus eingesetzt werden. Dabei sind neben Molekulargewicht und Radius auch der zweite Virialkoeffizient (A2) messbar. A2 ist ein Maß für die Löslichkeit von Substanzen und findet Anwendung im Bereich Proteinkristallisation und Proteinformulierung.

ASTRA Software

Die Detektoren von Wyatt Technology sind mit der ASTRA© 6 Software erhältlich. ASTRA® stellt alle Funktionen für die Charakterisierung von Polymeren und Proteinen zur Verfügung und unterstützt Batch-Messungen ebenso wie chromatographische Messungen mit SEC/ GPC/ FFF, Mehrwinkel-Lichtstreuung (MALS), Dynamische Lichtstreuung (DLS), Konzentrationsbestimmung (RI & UV) und Viskositätsmessung (VI).

ASTRA® überzeugt mit umfangreicher Funktionalität und einer komfortablen Benutzeroberfläche, die sehr effizientes Arbeiten ermöglicht. Ein Schwerpunkt ist die Automatisierung der Arbeitsabläufe. Ein Assistent führt durch die Erstellung von neuen Methoden, die sich mit wenigen Mausklicks komplett konzipieren lassen.

ASTRA® erlaubt auf einfache Weise den Vergleich verschiedener Messungen, bzw. Proben. So lassen sich die Ergebnisse grafisch in EasyGraph und numerisch in EasyTable gegenüber stellen.

Zusätzliche Funktionen wie die Bestimmung der statistischen Präzision der Messungen, Korrektur der sekundären Bandenverbreiterung, Berechnung der Anzahl der theoretischen Böden sowie für die Darstellung der differentiellen und kumulativen Molekulargewichtsverteilungen stehen bereit. Außerdem erlaubt ASTRA® die detaillierte Analyse von Copolymeren, Verzweigungen und Proteinkomplexen.

Typische TREOS® Protein-Anwendungen

  • Charakterisierung von Peptiden, Proteinen und Aggregaten
  • Proteinkristallisation, Proteinformulierung, Qualitätskontrolle
  • Pegylierte und glycosylierte Proteine, Protein-Komplexe
  • Membranproteine

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Wyatt Technology Europe GmbH
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D-56307 Dernbach

Tel.: +49 (0)2689 / 925-0
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