HPLC - Grundlagen

Kurze Einführung zum Thema HPLC

HPLC = Hochdruckflüssigkeitschromatographie (engl. High Pressure Liquid Chromatography), auch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (engl. High Performance Liquid Chromatography), neuere Entwicklungen beschreiben die Ultra High Performance Liquid Chromatography, kurz UHPLC. In der UHPLC werden kurze und dünne Säulen mit kleinen Partikeln (< 2µm) eingesetzt.

Chromatographische Trenntechnik:
Feste stationäre Phase (Säule), flüssige mobile Phase (Eluent, Laufmittel).

Trennprinzip: Analyten, gelöst in der mobilen Phase, gehen unterschiedlich starke Wechselwirkungen mit der stationären Phase ein und werden so zeitlich verzögert, man erhält ein Chromatogramm mit getrennten Peaks. Die mobile Phase beeinflusst zusätzlich das jeweilige Sorptions-Desorptions- oder Verteilungs-Gleichgewicht.

NP = Normalphasenchromatographie (engl. Normal Phase Chromatography):
Stationäre Phase polar (Kieselgel, Aluminiumoxid)
Mobile Phase unpolar (z.B. Hexan, Heptan, Chloroform, Dichlormethan)
Elution polarer Analyten durch Erhöhung der Polarität des Eluenten, z.B. durch Zugabe von Alkoholen (Isopropanol, Ethanol, Methanol)

HILIC = Hydrophile Interaktionschromatographie (engl. hydrophilic interaction liquid chromatography) ist eine Variante der Normalphasenchromatographie, die sich teilweise mit anderen chromatographischen Anwendungen, wie Ionenchromatographie und Umkehrphasenchromatographie, überlappt.

RP = Umkehrphasenchromatographie (engl. Reversed Phase Chromatography):
Stationäre Phase unpolar (z.B. unpolar modifiziertes Kieselgel wie C18, C8 usw.)
Mobile Phase polar (Wasser, Gemische mit Methanol oder Acetonitril)
Elution unpolarer Analyten durch Erhöhung des Anteils an Methanol oder Acetonitril